2022年4月27日，為進(jìn)一步規范新型冠狀病毒相關(guān)檢測試劑的管理，國家藥監局器審中心組織制定并發(fā)布了《新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑注冊審查指導原則》，詳見(jiàn)正文。

新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑注冊審查指導原則 

本指導原則旨在指導注冊申請人對新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“新冠病毒核酸檢測試劑”）注冊申報資料的準備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評部門(mén)提供參考。

本指導原則是對新冠病毒核酸檢測試劑的一般要求，申請人應依據產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應的科學(xué)依據，并依據產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化。

本指導原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定，隨著(zhù)法規和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內容也將適時(shí)進(jìn)行調整。

一、適用范圍

新型冠狀病毒（2019-nCoV）屬于β屬冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑約為60~140nm。具有5個(gè)必需基因，分別針對核蛋白（N）、病毒包膜（E）、基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）4種結構蛋白及RNA依賴(lài)性的RNA聚合酶（RdRp）。核蛋白（N）包裹RNA基因組構成核衣殼，外面圍繞著(zhù)病毒包膜（E）,病毒包膜包埋有基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）等蛋白。

實(shí)驗室檢查包括一般檢查，病原學(xué)及血清學(xué)檢查，胸部影像學(xué)檢查等。病原學(xué)檢查又包括核酸檢測和抗原檢測。核酸檢測主要采用逆轉錄PCR，二代測序等方法，在鼻、口咽拭子、痰液和其他下呼吸道分泌物等標本中均可檢測出新型冠狀病毒核酸。

新型冠狀病毒在流行過(guò)程中基因組不斷發(fā)生變異，新的變異株可能在傳播力、致病性、免疫逃逸能力等方面發(fā)生改變。變異株可能影響檢測試劑的性能，甚至出現漏檢。

本指導原則適用于采用逆轉錄實(shí)時(shí)熒光 PCR法，對咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液或痰液等呼吸道樣本中的新型冠狀病毒(2019-nCoV )核酸進(jìn)行體外定性的檢測試劑。

對于采用其他方法學(xué)的新冠病毒核酸檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內容不夠全面，申請人應參照本指導原則，根據產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價(jià)，并補充其他的評價(jià)資料。

本指導原則適用于新冠病毒核酸檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導原則針對新冠病毒核酸檢測試劑注冊申報資料中的部分內容進(jìn)行撰寫(xiě)，其他未盡事宜應當符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家藥品監督管理局公告2021年第122號）等相關(guān)法規要求。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監管信息

1. 產(chǎn)品名稱(chēng)及分類(lèi)編碼

產(chǎn)品名稱(chēng)應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場(chǎng)監督管理總局令第48號）及相關(guān)法規的要求，如新型冠狀病毒（2019-nCoV）核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）。根據《體外診斷試劑分類(lèi)規則》，該產(chǎn)品按照第三類(lèi)體外診斷試劑管理，分類(lèi)編碼為6840。

2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監管機構的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內容。應詳細說(shuō)明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測流程。提供不同適用機型的檢測通量，即一次檢測最多可檢測的樣本數。提供核酸提?。ㄊ止ず妥詣?dòng)提取方式應分別明確）和PCR擴增的時(shí)間，以及檢測全過(guò)程所需的時(shí)間。不同檢測流程，分別提供最少和最多檢測樣本量下的檢測時(shí)間。與已上市同類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行比較，比較內容包括樣本類(lèi)型，檢測原理，檢測靶基因，組成成分，內標，質(zhì)控品，判讀規則，分析性能和臨床性能等。

預期用途中明確產(chǎn)品檢測的靶基因，需選擇保守性和特異性相對較高的基因，同時(shí)還應考慮基因的擴增效率。具體檢測基因一般為ORF1ab和N基因，如果檢測其他基因，應提供相關(guān)指南或文獻，并分析所檢測基因的靈敏度和特異性是否符合臨床需求。

（三）非臨床資料

1. 產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

注冊申請人應當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩定的前提下，根據產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結果，依據國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻資料，結合產(chǎn)品特性按照《醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則》（2022年第8號）的要求編寫(xiě)。該類(lèi)產(chǎn)品作為第三類(lèi)體外診斷試劑，應當以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

新冠病毒核酸檢測試劑已有國家標準品，技術(shù)要求中應體現國家標準品的相關(guān)要求，并使用國家標準品對三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。

新冠病毒核酸檢測試劑的檢出限水平應符合國家相關(guān)指南文件規定，申報產(chǎn)品對國家靈敏度標準品的檢測結果應與聲稱(chēng)的檢出限水平相當。

如有適用的國家標準、行業(yè)標準，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應不低于相應的要求。

2. 分析性能研究

注冊申請人應采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數據、統計分析等詳細資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進(jìn)行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規格，需要對各包裝規格進(jìn)行分析或驗證。

適用的不同樣本類(lèi)型應分別進(jìn)行分析性能研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來(lái)源、樣本類(lèi)型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過(guò)程及數據等。研究中采用的新冠病毒陽(yáng)性樣本，應采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽(yáng)性和濃度水平，提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應為真實(shí)樣本，如涉及稀釋后檢測，應采用與適用樣本類(lèi)型一致的陰性基質(zhì)。不可采用質(zhì)粒進(jìn)行分析性能評估。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

2.1樣本穩定性

考慮到病毒RNA極易被降解的特性，應對樣本穩定性進(jìn)行詳細研究，包括采集后未經(jīng)處理的樣本，加入不同裂解液/消化液的樣本，滅活處理后的樣本，研究?jì)热莅ɡ洳乇４鏁r(shí)間，冷凍保存時(shí)間，凍融次數等。

如產(chǎn)品適用拭子、痰液等不同的樣本類(lèi)型，因其中干擾物質(zhì)存在較大差異，可能對病毒RNA降解的影響不同，建議對每種樣本類(lèi)型均進(jìn)行穩定性研究。

如核酸提取液可不立即進(jìn)行檢測，還需對核酸提取液的保存條件和穩定性進(jìn)行研究。

2.2適用的樣本類(lèi)型

列明產(chǎn)品適用的樣本類(lèi)型。

2.3企業(yè)參考品驗證

根據主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細的試驗數據。

2.4精密度

應對精密度指標，如標準差或變異系數等的評價(jià)標準做出合理要求。應考慮運行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價(jià)。精密度評價(jià)試驗應包含核酸提取步驟。設定合理的精密度評價(jià)周期，例如為期至少20天的檢測。對檢測數據進(jìn)行統計分析，獲得重復性、實(shí)驗室內精密度、實(shí)驗室間精密度、批間精密度等結果。

采用臨床樣本進(jìn)行精密度評價(jià)，應至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽(yáng)性樣本、中/強陽(yáng)性樣本，并根據產(chǎn)品特性設定適當的精密度要求，例如：

陰性樣本：待測物濃度低于檢出限或為零濃度，陰性檢出率應為100%（n≥20）。

臨界陽(yáng)性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽(yáng)性檢出率應≥95%（n≥20）。

中/強陽(yáng)性樣本：待測物濃度呈中度到強陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

2.5包容性

2.5.1病毒樣本的驗證

驗證具有時(shí)間和區域特征性的至少20個(gè)不同來(lái)源的陽(yáng)性樣本（臨床樣本或病毒培養物），應包括檢出限和重復性的驗證。樣本應覆蓋目前國內流行的變異株型別，并適當納入其他代表性的變異株。注意包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復。

2.5.2生物信息學(xué)分析及人工合成樣本的驗證

按照器審中心另行公布的變異株驗證相關(guān)要求進(jìn)行評價(jià)。

2.6檢出限

2.6.1檢出限的確定

將不同來(lái)源的至少5個(gè)新冠病毒樣本梯度稀釋于與適用樣本一致的基質(zhì)中，進(jìn)行檢出限的確定。每個(gè)濃度梯度最少重復3次檢測，以100%可檢出的最低濃度水平作為估計檢出限，在此濃度附近制備若干梯度濃度樣本，每個(gè)濃度至少重復20次檢測，將具有95%陽(yáng)性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。

2.6.2檢出限的驗證

選擇另外5個(gè)不同來(lái)源的新冠病毒樣本在檢出限濃度水平進(jìn)行驗證，應達到95%陽(yáng)性檢出率。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應

需驗證相關(guān)病原體和多例人類(lèi)基因組DNA（表1）的交叉反應。除SARS冠狀病毒和MERS冠狀病毒可采用假病毒外，各病原體均應采用臨床樣本或培養物進(jìn)行驗證。建議在病毒和細菌感染的醫學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應的驗證。通常，細菌感染的濃度水平為106CFU/mL或更高，病毒為105PFU/mL或更高，提供所有用于交叉反應驗證的病原體樣本的來(lái)源、陰陽(yáng)性、種屬/型別和濃度確認等試驗資料。

表1 需進(jìn)行交叉反應驗證的物質(zhì)

2.7.2競爭性干擾

申請人應充分考慮臨床上容易與新冠病毒合并感染的病原體，在高濃度的情況下對低濃度（例如檢出限濃度）新冠病毒核酸檢測的影響，進(jìn)行競爭性干擾研究。

2.7.3干擾試驗

應根據所采集樣本類(lèi)型，針對可能存在的內源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行試驗，檢測包含臨界陽(yáng)性水平在內的新冠病毒樣本。對結果進(jìn)行合理的統計分析，對比添加干擾物質(zhì)前后的 Ct 值差異。檢測的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)及在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)。 

表2 用于干擾試驗的物質(zhì)

2.8核酸（RNA）提取/純化性能

在進(jìn)行核酸檢測之前，建議有核酸（RNA）提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的RNA外，還應有相應的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進(jìn)行抗干擾、精密度和檢出限的驗證。

2.9反應體系

2.9.1樣本采集和處理

2.9.1.1樣本采集方式的選擇

2.9.1.2樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：是否受病程、臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

2.9.1.3采樣拭子及樣本保存液的選擇：對拭子頭和拭子桿的材質(zhì)要求。明確保存液或裂解液的成分、濃度、使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需驗證檢出限和重復性。

2.9.1.4樣本處理方式的選擇：研究產(chǎn)品適用的滅活方式，包括熱滅活和化學(xué)滅活，研究?jì)热莅饮}的使用濃度及用量、樣本用量。如適用，對痰液消化方式及消化液進(jìn)行研究。

2.9.2核酸提取和反應體系

研究確定最佳核酸提取和反應體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度及反應各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數等。建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴大總反應體系和加樣量，以提高檢測靈敏度。

反應體系研究應確保不同基因的檢測能力具有一致性，對于結果為單基因陽(yáng)性時(shí)需要復測的試劑，需使用至少10例臨床樣本梯度稀釋?zhuān)^(guān)察各基因檢出情況是否存在顯著(zhù)差異，避免過(guò)高的復測率。

提交不同適用機型基線(xiàn)和閾值循環(huán)數的確定資料。

不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述，并提交驗證資料。

3. 穩定性研究

申報試劑的穩定性主要包括實(shí)時(shí)穩定性（有效期）、開(kāi)瓶穩定性及凍融次數限制等研究，申請人可根據實(shí)際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究資料應包括具體的實(shí)施方案、詳細的研究數據以及統計分析結論。對于實(shí)時(shí)穩定性研究，應提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4. 陽(yáng)性判斷值研究

陽(yáng)性判斷值一般為申報產(chǎn)品檢測病毒核酸陽(yáng)性的Ct值。陽(yáng)性判斷值研究用樣本來(lái)源應具有多樣性和代表性，考慮不同時(shí)間、地域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素，盡量納入較多弱陽(yáng)性和高陰性水平的樣本。在條件允許的情況下，建議覆蓋目前的流行株進(jìn)行陽(yáng)性判斷值研究。采用ROC曲線(xiàn)分析建立每個(gè)檢測靶基因的陽(yáng)性判斷值，然后確定產(chǎn)品的判讀規則（單基因陽(yáng)性、雙基因陽(yáng)性等）。對于結果為單基因陽(yáng)性時(shí)需要復測的試劑，建議對陽(yáng)性判斷值研究數據進(jìn)行復測率的統計分析。如判定值存在灰區，應提供灰區的確認資料。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類(lèi)型，需要對各樣本類(lèi)型進(jìn)行陽(yáng)性判斷值的驗證。

提交陽(yáng)性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來(lái)源機構、檢測結果等信息。

提供內標檢測結果范圍的確定方法和研究資料。

5. 其他資料

5.1主要原材料研究資料

該類(lèi)產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、參考品等。應提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量控制標準等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應提供其詳細制備過(guò)程；如主要原材料源于外購，應提供資料包括：選擇該原材料的依據及對比篩選試驗資料、供貨方提供的質(zhì)量標準、出廠(chǎng)檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。供應商應固定，不得隨意更換。

5.1.1引物和探針：應詳述引物和探針的設計原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點(diǎn)及兩者的對應情況。建議每種病毒設計兩套或多套引物、探針以供篩選，通過(guò)序列比對和功能性試驗等方式，對病毒進(jìn)行包容性和特異性（如交叉反應）的評價(jià)，其中序列比對包括與已公布新冠病毒序列的比對，及與易產(chǎn)生交叉反應的其他病原體的序列比對；功能性試驗包括對不同來(lái)源、不同滴度的新冠病毒核酸陽(yáng)性樣本，和不同的近緣病原體的檢測。通過(guò)篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標準應至少包括序列準確性、純度、濃度及功能性實(shí)驗等。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，應提供對其純度、濃度、功能性等的詳細驗證資料。

5.1.3酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆轉錄酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應分別對酶活性、功能性等進(jìn)行評價(jià)和驗證。

5.1.4質(zhì)控品

試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品。陽(yáng)性質(zhì)控品應包含試劑盒檢測的靶序列，可采用假病毒制備。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測的全過(guò)程，以對整個(gè)提取和PCR擴增過(guò)程、試劑/設備、交叉污染等環(huán)節進(jìn)行合理質(zhì)量控制。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過(guò)程、濃度范圍等試驗資料，對質(zhì)控品的檢測結果Ct值范圍做出明確的要求。

5.1.5內標

內標，又稱(chēng)內對照，可對管內抑制導致的假陰性結果進(jìn)行質(zhì)量控制，應與靶核酸一同提取及擴增。申請人需對內標的引物、探針設計和相關(guān)反應體系的濃度做精確驗證，既要保證內標熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線(xiàn)又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內標的檢測結果Ct值范圍。建議科學(xué)設置內標，對待測樣本的取樣質(zhì)量、試劑的反應體系進(jìn)行監控。

5.1.6企業(yè)參考品

該類(lèi)產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復性參考品。應根據產(chǎn)品性能驗證的實(shí)際需要設置企業(yè)參考品。

應提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度確認方法或試劑等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品應采用臨床樣本，或者使用病毒培養物加入陰性基質(zhì)。企業(yè)參考品的設置建議如下：

陽(yáng)性參考品：應著(zhù)重考慮不同來(lái)源的病毒樣本和滴度要求，應至少選取不同來(lái)源的5個(gè)病毒樣本。

陰性參考品：主要涉及對交叉反應的驗證情況，建議包括冠狀病毒（HKU1、OC43、NL63、229E）、SARS冠狀病毒（可采用假病毒）、MERS冠狀病毒（可采用假病毒）、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。

檢出限參考品：可采用95%陽(yáng)性檢出水平或略高于檢出限的水平，如100%陽(yáng)性檢出水平。

重復性參考品：建議包括高、低兩個(gè)濃度的樣本，其中一個(gè)濃度應為檢出限附近的濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結合文字的方式表述。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床評價(jià)資料

該類(lèi)試劑應通過(guò)臨床試驗路徑進(jìn)行臨床評價(jià)。臨床試驗應滿(mǎn)足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》（國家藥品監督管理局通告2021年第72號）的要求，如相關(guān)法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。下面僅說(shuō)明該類(lèi)試劑臨床試驗中應關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題。

該類(lèi)試劑臨床試驗應按要求在三家以上臨床試驗機構進(jìn)行，開(kāi)展臨床試驗的機構應按要求經(jīng)國家藥品監督管理局醫療器械臨床試驗機構備案系統備案。

1. 試驗設計

采用試驗體外診斷試劑與已上市同類(lèi)產(chǎn)品及臨床參考標準進(jìn)行比較研究，從而對產(chǎn)品臨床性能進(jìn)行確認。

2. 受試者選擇

臨床試驗的入組人群應為產(chǎn)品的預期適用人群，該產(chǎn)品的適用人群包括：新型冠狀病毒感染的疑似病例，以及根據國家衛生健康委員會(huì )相關(guān)規定需到臨床試驗機構就診并進(jìn)行新冠病毒核酸檢測的其他人群。臨床試驗入組人群應以新冠疑似病例為主，并能代表適用人群的各種情形，如：最終確診病例應包括不同病毒載量（根據對比試劑核酸檢測結果確定）的病例，最終排除病例應適當納入有疑似癥狀的其他呼吸道病原體感染病例。應注意，排除病例應絕大部分來(lái)源于疑似病例，也可適量納入部分出院排除病例和其他疾病患者。

國家衛生健康委員會(huì )發(fā)布了《新型冠狀病毒肺炎診療方案》《新型冠狀病毒肺炎防控方案》和其他相關(guān)診療指南，申請人在進(jìn)行臨床試驗時(shí)應考慮現行方案對疑似病例和其他適用人群的規定，按照規定入組病例進(jìn)行臨床試驗。

3. 臨床試驗樣本要求

試驗體外診斷試劑可同時(shí)適用于上呼吸道樣本和下呼吸道樣本，也可僅適用于上呼吸道樣本。建議按照《新冠病毒樣本采集和檢測技術(shù)指南》進(jìn)行樣本采集。

應采用臨床原始樣本進(jìn)行臨床試驗。臨床試驗所用樣本類(lèi)型、樣本采集、樣本處理、樣本穩定性、核酸提取純化及結果判讀等應分別滿(mǎn)足試驗體外診斷試劑與對比試劑產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的要求，并在臨床試驗小結和報告中明確上述內容。臨床試驗前應對上述內容進(jìn)行充分的性能評估。

4. 臨床試驗樣本量

應基于與對比試劑的比較研究估算臨床試驗樣本量。根據已有研究數據進(jìn)行初步估算，建議對比試劑（核酸檢測試劑）檢測陽(yáng)性樣本不少于200例，陰性樣本不少于300例。如涉及多種樣本類(lèi)型，每種樣本類(lèi)型的陽(yáng)性和陰性樣本例數建議均不少于70例。

應包括至少50例由對比試劑任一基因確定為弱陽(yáng)性的樣本(一般將任一基因的Ct值小于cutoff值3～5個(gè)Ct值的樣本定義為弱陽(yáng)性樣本)，如涉及多種樣本類(lèi)型，弱陽(yáng)性樣本應覆蓋每種樣本類(lèi)型。

5. 對比方法

應選擇質(zhì)量較好的已上市同類(lèi)產(chǎn)品作為對比試劑，同時(shí)，將試驗體外診斷試劑的檢測結果與臨床參考標準結果進(jìn)行對比。應根據國家衛生健康委員會(huì )發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案》《新型冠狀病毒肺炎防控方案》及其他疾病的相關(guān)診療指南等，獲得病例的臨床參考標準結果。

試驗體外診斷試劑與對比試劑應針對同一份樣本或同步采集的相同樣本類(lèi)型的樣本（采樣順序應隨機）進(jìn)行檢測。若尚無(wú)相同樣本類(lèi)型的核酸檢測試劑批準上市，也可選擇同源的、可比的樣本，進(jìn)行對比試劑的檢測。申請人應對試驗體外診斷試劑與對比試劑的可比性進(jìn)行充分的論證。對于新的樣本類(lèi)型，申請人還應對新樣本類(lèi)型的適用性及其與對比試劑檢測時(shí)所用同源樣本類(lèi)型的可比性進(jìn)行充分論證。

6. 統計分析

6.1描述性統計分析

應對入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析，包括年齡、性別和臨床診斷背景信息等。

6.2與對比試劑的總體一致性統計分析

統計分析一般以2×2表的形式對結果進(jìn)行總結，并據此計算陰性符合率、陽(yáng)性符合率、總符合率及其95%置信區間。

6.3與臨床參考標準（確診/排除）的總體統計分析

原則上，納入臨床試驗的所有病例均應有新冠確診/排除結果。如少部分人群確無(wú)明確的臨床參考標準結果，可不納入該部分統計分析。所有具有臨床參考標準結果的病例，均應納入該部分統計分析。針對新的樣本類(lèi)型，應特別關(guān)注試驗體外診斷試劑與臨床參考標準的對比結果，因此，應盡量保證納入臨床試驗的病例有可溯源的新冠確診/排除結果，確保該部分統計具有充分的樣本量。

應以病例為單位，進(jìn)行試驗體外診斷試劑與臨床參考標準（確診/排除）的總體統計分析。統計分析一般以2×2表的形式對結果進(jìn)行總結，并據此計算臨床靈敏度、臨床特異度及其95%置信區間。

7. 其他

7.1如試驗體外診斷試劑同時(shí)適用于快檢機型和常規機型，且經(jīng)臨床前驗證試驗體外診斷試劑在快檢機型與常規機型上的檢測性能沒(méi)有顯著(zhù)差異，但在樣本提取純化或反應體系等方面存在明顯差異，導致檢測時(shí)間上存在明顯差異的，建議以代表性快檢機型為主機型進(jìn)行臨床試驗，同時(shí)進(jìn)行一定數量的代表性快檢機型與代表性常規機型之間的比較研究。

7.2如試驗體外診斷試劑為包括新冠項目的多項聯(lián)檢試劑，應考慮聯(lián)檢的臨床意義，確認多項聯(lián)檢試劑具有相同的適用人群，采用相同的樣本類(lèi)型。多項聯(lián)檢時(shí)，每個(gè)項目的檢測均應滿(mǎn)足相應指導原則的要求。每個(gè)項目均應按照試驗體外診斷試劑和對比試劑產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行臨床試驗，如：樣本采集、保存液/采樣液/處理液和核酸提取純化試劑等的要求。

7.3如試驗體外診斷試劑包括不同樣本類(lèi)型，針對每種樣本類(lèi)型，可參考6.2和6.3的相關(guān)內容，分別進(jìn)行統計分析。針對總體統計分析及樣本類(lèi)型的分層統計分析，臨床試驗結果均應滿(mǎn)足臨床使用需求。

7.4針對不一致結果，應結合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀和疾病轉歸等信息進(jìn)行充分的分析。

7.5此外，還應關(guān)注并計算試驗體外診斷試劑的復測率。申請人應結合臨床使用需求，嚴格控制復測率。

8. 境外臨床試驗數據的認可

境外臨床試驗數據應符合《接受醫療器械境外臨床試驗數據技術(shù)指導原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗數據的注冊審查指導原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗方案、報告和倫理審查意見(jiàn)，以及該數據適用于中國患者人群的論證資料、境內外臨床試驗質(zhì)量管理差異的對比資料和臨床試驗質(zhì)量管理差異對于臨床試驗結果影響的論證資料。

注冊申請人應根據上述臨床試驗技術(shù)審評要求，論證境外臨床試驗數據的充分性。

9. 臨床評價(jià)資料的形式要求

申請人應按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》及《體外診斷試劑臨床試驗數據遞交要求注冊審查指導原則》等法規文件要求提交臨床評價(jià)綜述、各機構倫理審查意見(jiàn)、臨床試驗方案、臨床試驗小結、臨床試驗報告及臨床試驗數據庫等。

臨床試驗數據表作為臨床試驗小結的附件提交。數據表應包括唯一可追溯的樣本編號、年齡、性別、樣本類(lèi)型、受試者臨床診斷背景信息、新冠確診/排除結果、試驗體外診斷試劑的檢測結果和對比試劑的檢測結果（如：各基因和內標的Ct值）等。具體內容詳見(jiàn)附表。

其中，受試者臨床診斷背景信息應盡量明確各病例的體征、癥狀、流行病學(xué)史、影像學(xué)檢測結果、白細胞數和淋巴細胞數、臨床診療過(guò)程中所有新冠病毒核酸的檢測時(shí)間和結果等，以證明受試者為新冠疑似病例或其他需檢測人群。對于出院排除病例，還應明確該病例的確診入院時(shí)間和出院時(shí)間等，應滿(mǎn)足診療方案中有關(guān)出院排除的相關(guān)要求。

應在各臨床試驗機構隨機選擇至少50個(gè)樣本（包括強陽(yáng)、中陽(yáng)和所有弱陽(yáng)性樣本），提交試驗體外診斷試劑與對比試劑的檢測圖譜。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)格式應滿(mǎn)足《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中技術(shù)內容應與注冊申報資料中的相關(guān)研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，應以規范格式進(jìn)行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。新冠病毒核酸檢測試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)應重點(diǎn)關(guān)注以下內容。

1．【預期用途】

本試劑盒用于體外定性檢測新型冠狀病毒肺炎疑似病例、其他需要進(jìn)行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者的xx樣本中，新型冠狀病毒（2019-nCoV）xx基因。

有關(guān)“疑似病例”等人群的定義參照《新型冠狀病毒肺炎診療方案》《新型冠狀病毒肺炎防控方案》等文件執行。

該產(chǎn)品在使用上應當遵守《新型冠狀病毒肺炎診療方案》《新型冠狀病毒肺炎防控方案》等文件的相關(guān)要求。

開(kāi)展新型冠狀病毒核酸檢測，應符合《新冠病毒樣本采集和檢測技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。

本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標準。建議結合患者臨床表現和其他實(shí)驗室檢測對病情進(jìn)行綜合分析。

2.【檢驗原理】

簡(jiǎn)述產(chǎn)品的核酸提取和RT-PCR原理。明確內標基因名稱(chēng)及其作用。如采用了防污染措施，進(jìn)行簡(jiǎn)要描述。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑，病毒保存液，痰液消化液等的產(chǎn)品名稱(chēng)，生產(chǎn)廠(chǎng)家，貨號及注冊證號、備案號等信息。

4.【樣本要求】

需詳細描述樣本采集和處理方式，包括采樣步驟，適用的拭子材質(zhì)，保存液、消化液的使用體積，滅活方式等。描述樣本及核酸提取液的保存穩定性。

5.【檢驗方法】

明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰、陽(yáng)性質(zhì)控品與待測樣本同步進(jìn)行核酸提取操作。明確各適用機型的反應參數設置。明確質(zhì)控品和內標的檢測結果Ct值范圍，作為實(shí)驗有效性的標準。

6.【檢驗結果的解釋】

通過(guò)擴增曲線(xiàn)和Ct值進(jìn)行結果陰陽(yáng)性的判斷，列明結果陰性、陽(yáng)性、復測、無(wú)效等所有情形。

7.【檢驗方法的局限性】

7.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

7.2有關(guān)假陽(yáng)性結果的可能性分析

7.2.1 如果樣本在運輸、處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染，則可能導致假陽(yáng)性結果；

7.2.2 實(shí)驗環(huán)境有PCR產(chǎn)物等氣溶膠污染，則可能導致假陽(yáng)性結果；

7.2.3 實(shí)驗過(guò)程中使用的耗材、設備等受污染，則可能導致假陽(yáng)性結果。

7.3有關(guān)假陰性結果的可能性分析

7.3.1不合理的樣本采集、轉運、儲存及處理、樣本中病原體含量過(guò)低均有可能導致假陰性結果；

7.3.2該病原體待測靶序列的變異或其他原因導致的序列改變可能會(huì )導致假陰性結果；

7.3.3 未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì )導致假陰性結果。

8.【產(chǎn)品性能指標】

簡(jiǎn)述以下性能指標：

8.1國家標準品和企業(yè)參考品的符合率。

8.2檢出限：簡(jiǎn)要介紹評價(jià)方法、所用樣本情況以及評價(jià)結果。

8.3對包容性的研究情況進(jìn)行總結。描述新冠病毒變異株對產(chǎn)品檢測結果的影響，例如影響產(chǎn)品的檢出限或者導致單基因檢測陽(yáng)性等。

8.4對精密度的研究情況進(jìn)行總結。

8.5分析特異性

8.5.1交叉反應：詳述交叉反應驗證的病原體種類(lèi)，及有/無(wú)交叉反應的濃度水平。

8.5.2干擾試驗：說(shuō)明驗證的干擾物質(zhì)種類(lèi)及有/無(wú)干擾反應的濃度水平。

8.6臨床試驗：簡(jiǎn)要介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結果和結論等。

9.【注意事項】

9.1臨床實(shí)驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增實(shí)驗室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗室要求及《醫療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊》（試行第二版）執行。

9.2試劑保存運輸及使用過(guò)程中多種因素可能導致性能變化，如保存運輸不當、樣本采集、樣本處理及檢測過(guò)程操作不規范等，請嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作。因拭子等樣本采集過(guò)程及病毒感染過(guò)程本身的特點(diǎn)，可能存在采集到的樣本量不足等原因帶來(lái)的假陰性結果，應結合臨床其他診療信息綜合判斷，必要時(shí)復測。

9.3生物安全防護相關(guān)內容

9.4避免實(shí)驗室污染的措施

三、參考文獻

1.《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場(chǎng)監督管理總局令第48號）[Z].

2.《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家藥品監督管理局公告2021年第122號）[Z].

3. 中華人民共和國衛生健康委員會(huì ). 新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第九版) [Z]. 2022-03-15.

4. 中華人民共和國衛生健康委員會(huì ).新型冠狀病毒肺炎防控方案（第八版）[Z].2021-05-14. 

附表

臨床試驗數據表